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页面导航:首页 > 行业资讯 > 液相色谱常见问题与解决方法

液相色谱常见问题与解决方法


    

操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象,并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

 

 

A、没有压力显示,没有流动相流动

 

原 因

解决方法

1、电源问题 

1、接通电源,开机

2、保险丝被烧坏

2、更换保险丝

3、控制器设定不正确或设定失败

3、a、采取恰当的设定

   b、修理或更换控制器

4、柱塞杆折断

4、更换柱塞杆

5、泵头内有空气

5、溶剂脱气、启动泵抽出空气

6、流动相不足

6、a、补充流动相

   b、更换入口滤头

7、单向阀损坏

7、更换单向阀

8、漏液

8、拧紧或更换手紧接头

 

B、  流动相流动正常,但没有压力显示

 

原 因

解决方法

1、仪表损坏

1、更换仪表

2、压力传感器损坏

2、更换压力传感器

 

C、 压力持续偏高

 

原 因

解决方法

1、流速设定过高

1、调整流速设定

2、柱前筛板堵塞

2、a、在允许情况下反冲色谱柱

   b、更换筛板

   c、更换色谱柱

3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀

3、a、使用恰当的流动相

   b、冲洗色谱柱

4、色谱柱选择不当

4、选择恰当的色谱柱

5、进样阀损坏

5、清洗或更换进样阀

6、柱温过低

6、提高温度

7、控制器失常

7、修理或更换控制器

8、保护柱阻塞

8、清洗或更换保护柱

9、在线过滤器阻塞

9、清洗或更换在线过滤器

 

D、压力持续偏低

 

原 因

解决方法

1、流速设定过低

1、调整流速

2、系统漏液

2、确定漏液位置并维修

3、色谱柱选择不当

3、选择恰当的色谱柱

4、柱温过高

4、降低温度

5、控制器失常

5、维修或更换控制器

 

E、压力不断上升

 

原 因

解决方法

1、见列表C

1、见列表C

 

F、压力降为零

 

原 因

解决方法

1、见列表A、B

1、见列表A、B

 

G、压力不断下降,但不回零

 

原 因

解决方法

1、见列表D

1、见列表D

 

 H、压力波动

 

原 因

解决方法

1、泵中有气体

1、a、溶剂脱气

     b、从泵中除去气体

2、单向阀损坏

2、更换单向阀

3、泵密封损坏

3、更换泵密封

4、脱气不充分

4、a、溶剂脱气

   b、改变脱气方法(使用在线脱气法等)

5、系统漏液

5、确定漏液位置并维修

6、使用梯度洗脱

6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动

 

2

 

 

 

  

通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。

 

 

A、接头处漏液

 

原 因

解决方法

1、接头松动

1、拧紧

2、接头磨损

2、更换

3、接头过紧

3、a、拧松,再重新拧紧

   b、更换

4、接头被污染

4、a、拆下清洗

   b、更换

5、部件不匹配

5、使用同一品牌的配件

 

B、 泵漏液

 

原 因

解决方法

1、单向阀松动

1、a、拧紧单向阀(不必拧的过紧)

   b、更换单向阀

2、接头松动

2、拧紧接头(不必拧的过紧)

3、混合器密封损坏

3、a、更换混合器密封

   b、更换混合器

4、泵密封损坏

4、维修或更换泵密封件

5、压力传感器损坏

5、维修或更换压力传感器

6、脉冲阻尼器损坏

6、更换脉冲阻尼器

7、比例阀损坏

7、a、检查隔膜,如果漏液立即更换

   b、检查手紧接头,损坏的立即更换

8、放空阀的损坏

8、a、拧紧放空阀

   b、更换放空阀

 

C、  进样阀漏液

 

原 因

解决方法

1、转子密封损坏

1、重新安装或更换进样阀

2、定量环阻塞

2、更换定量环

3、进样口密封松动

3、调整

4、进样针头尺寸不合适

4、使用恰当的进样针

5、废液管中产生虹吸

5、保持废液管高于废液液面

6、废液管阻塞

6、更换或疏通废液管

 

D、  色谱柱漏液

 

原 因

解决方法

1、尾端接头松动

1、拧紧接头

2、卡套内有填料

2、拆下、清洗卡套、重新安装

3、筛板厚度不合适

3、使用合适的筛板(参考下表)

                         

                             筛板选择指导

 

物质粒径

筛板孔径

3-4u

0.5u

5-20u

2u

 

E、  检测器漏液

 

原 因

解决方法

1、流通池垫片损坏

1、a、避免过大的背景压力(压力降)

   b、更换垫片

2、流通池窗破碎

2、更换窗口

3、手紧接头漏液

3、拧紧或更换

4、废液管阻塞

4、更换废液管

5、流通池阻塞

5、重新安装或更换

 

3

液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

 

 

A、  峰拖尾

 

原 因

解决方法

1、筛板阻塞

1、a、反冲色谱柱

   b、更换进口筛板

   c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷

2、填充色谱柱

3、干扰峰

3、a、使用更长的色谱柱

   b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误

4、调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

  b、更改色谱柱

 

B、  峰前延

 

原 因

解决方法

1、柱温低

1、升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当

2、使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载

3、降低样品含量

4、色谱柱损坏

4、见A1、A2

 

C、   峰分叉

 

原 因

解决方法

1、 保护柱或分析柱污染

 

1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。

          2、样品溶剂不溶于流动相

2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

 

D、  峰变形

 

原 因

解决方法

1、样品过载

1、减少样品载量

 

E、 早出的峰变形

 

原 因

解决方法

1、样品溶剂选择不恰当

1、a、减少进样体积

   b、运用低极性样品溶剂

 

F、  早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

 

原 因

解决方法

1、柱外效应

1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)

   b、使用小体积的流通池

 

G、  K’增加时,脱尾更严重

 

原 因

解决方法

1、二级保留效应,反相模式

1、a、加入三乙胺(或碱性样品)

   b、加入乙酸(或酸性样品)

   c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)

   d、更换一支柱子 

2、二级保留效应,正相模式

2、a、加入三乙胺(或碱性样品)

   b、加入乙酸(或酸性样品)

   c、加入水(或多官能团化合物)

   d、试用另一种方法

3、二级保留效应,离子对

3、加入三乙胺(或碱性样品)

 

H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾

 

原 因

解决方法

1、缓冲不合适

1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液

   b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

 

I、额外的峰

 

原 因

解决方法

1、样品中有其他组份

1、正常

2、前一次进样的洗脱峰

2、a、增加运行时间或梯度斜率

   b、提高流速

3、空位或鬼峰

3、a、检查流动相是否纯净

   b、使用流动相作为样品溶剂

   c、减少进样体积

 

J、   保留时间波动

 

原 因

解决方法

1、温控不当

1、调好柱温

2、流动相组分变化

2、防止变化(蒸发、反应等)

3、色谱柱没有平衡

3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

 

K、  保留时间不断变化

 

原 因

解决方法

1、流速变化

1、重新设定流速

2、泵中有气泡

2、从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当

3、a、更换合适的流动相

   b、选择合适的混合流动相

 

L、  基线漂移

 

原 因

解决方法

1、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)

1、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器

2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)

2、使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体

3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)

4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)

4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化

5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时

6、用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。

8、使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂,但检测器未调整。

9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。

10、将波长调整至最大吸收波长处

 

M、 基线噪音(规则的)

 

原 因

解决方法

1、在流动相、检测器或泵中有空气

1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液

2、见第三部分。检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。

3、流动相混合不完全

3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响(柱温过高,检测器未加热)

4、减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备

5、断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。

6、泵振动

6、在系统中加入脉冲阻尼器

 

N、 基线噪音(不规则的)

 

原 因

解决方法

1、          漏液

1、见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成

2、检查流动相的组成。

3、流动相各溶剂不相溶

3、选择互溶的流动相

4、检测器/记录仪电子元件的问题

4、断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。

5、系统内有气泡

5、用强极性溶液清洗系统

6、检测器内有气泡

6、清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器

7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。)

7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

8、检测器灯能量不足

8、更换灯

9、色谱柱填料流失或阻塞

9、更换色谱柱

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常

10、维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置

 

O、 宽峰

 

原 因

解决方法

1、流动相组成变化

1、重新制备新的流动相

2、流动相流速太低

2、调节流速

3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)

3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。

4、检测器设定不正确

4、调整设定

5、柱外效应影响

a、柱子过载

b、检测器对反应时间或池体积响应过大

c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大

d、记录仪响应时间太长

5、           

a、 小体积进样(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀释样品

b、减少响应时间或使用更小的流通池

c、 使用内径为0。007-0。01的短管路

d、减少响应时间

6、缓冲液浓度太低

6、增加浓度

7、保护柱污染或失效

7、更换保护柱

8、色谱柱污染或失效,塔板数较低

8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。

9、柱入口塌陷

9、打开柱入口,填补塌陷或更换柱子

10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰

10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

11、柱温过低

11、提高柱温。除非特殊情况,温度不宜超过75℃

12、检测器时间常数太大

12、使用较小的时间常数

 

P、  分离度降低

 

原 因

解决方法

1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)

1、重新配置流动相

2、保护柱或分析柱阻塞

2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。

 

Q、 所有的峰面积都太小

 

原 因

解决方法

1、检测器衰减设定过高

1、减少衰减的设定

2、检测器时间常数设定太大

2、设定较小的时间常数

3、进样量太少

3、增大进样量

4、记录仪连接不当

4、使用正确的连接

 

R、 所有的峰面积都太大

 

原 因

解决方法

1、检测器衰减设定过低

1、采取较大的衰减

2、进样过多

2、减少进样量

3、记录仪连接不正确

3、正确连接记录仪

 

4

 

 

以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。

 

A、 手动进样阀,转动不灵

 

原 因

解决方法

1、转子密封损坏

1、更换或调整转子密封

2、转子太紧

2、调整转子的松紧度

 

B、   手动进样阀,载样困难

 

原 因

解决方法

1、进样阀安装不当

1、重新安装

2、定量环阻塞

2、清洗或更换定量环

3、进样器污染

3、清洗或更换进样器

4、管路阻塞

4、清洗或更换管路

 

C、 自动进样阀,不能转动

 

原 因

解决方法

1、无压力(或电源)

1、提供恰当的压力(电源)

2、转子太紧

2、调整转子的松紧度

3、进样阀安装不当

3、重新安装

 

D、 自动进样阀,其它问题

 

原 因

解决方法

1、阻塞

1、清洗或更换阻塞部件

2、机械故障

2、见随机维修手册

3、控制器故障

3、维修或更换控制器

 

5

 

 

 

       由气味、景象和声音可以发现的问题,你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯,每天花上几分钟运用你的感官(除了味觉)来“感觉”你的液相色谱是否存在问题,这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。

 

 

A、  溶剂的气味

 

原 因

解决方法

1、漏液

1、见section 3

2、溅出

2、a、检查废液瓶是否已满

   b、找到溅出的部位并清洗干净

 

B、 热气味

 

原 因

解决方法

1、仪器过热

1、a、检查并调节通风设施

   b、检查并调节温度设定

   c、关掉仪器,查找维修手册

 

C、  读数不正常

 

原 因

解决方法

1、压力不正常

1、见section 2

2、柱温箱问题

2、

a、检查并调节设定

b、参照用户手册

3、检测器灯失效

3、更换灯

 

D、  灯警告

 

原 因

解决方法

1、压力超出极限值

1、

a、检查是否阻塞

b、检查并调节极限值的设定

2、其它警示灯

2、见用户手册

 

E、   警告音

 

原 因

解决方法

1、溶剂泄漏/溅出

1、找到并解决

2、其它警告音

2、见用户手册

 

F、  刺耳的短音或长音

 

原 因

解决方法

1、轴承失效

1、见用户手册

2、润滑不够

2、进行恰当的润滑

3、机械故障

3、见用户手册

 

6

常见故障及日常维护

下表中列出了液相色谱常见的一些问题,右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。

 

                                              

                  溶剂瓶

 

问 题

维 护

1、进口筛板阻塞

1、

a、更换(3-6个月)

b、过滤流动相,0.5u滤膜

2、气泡

2、流动相脱气

 

                       泵

问 题

维 护

1、气泡

1、流动相脱气

2、泵密封损坏

2、更换(3个月)

3、单向阀损坏

3、过滤流动相,运用在线过滤,准备备用单向阀

 

                    进样阀

 

问 题

维 护

1、转子密封损坏

1、

a、不要拧的过紧

b、过滤样品

 

                    色谱柱

 

问 题

维 护

1、筛板阻塞

1、a、过滤流动相

   b、过滤样品

   c、运用在线过滤或保护柱

2、柱头塌陷

2、a、避免使用PH>8的流动相(针对大部分硅胶的柱子)

   b、使用保护柱

   c、使用预柱(饱和色谱柱)

 

                   检测器

 

问 题

维 护

1、灯失效,检测器响应降低,噪音增大

1、更换(6个月)或准备备用灯

2、流通池有气泡

2、a、保持流通池清洁

   b、池后使用反压抑制器

   c、流动相脱气

 

                   一般

 

问 题

维 护

1、腐蚀/摩擦损坏

1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁

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